Plásmido Doble Nickase (h) HMG-2/HMGB2: sc-404000-NIC

HMGB2 (HMG-2) codifica una proteína de tipo “high mobility group box” que se une al ADN y lo curva para modular la estructura de la cromatina y la regulación de la transcripción. HMGB2 participa en la dinámica de los nucleosomas, en la comunicación entre potenciadores y promotores, y en las respuestas al daño del ADN, influyendo en la progresión del ciclo celular, los programas de senescencia y la diferenciación específica de linaje. Mediante interacciones con factores de transcripción y remodeladores de cromatina, ayuda a coordinar la organización del genoma durante la replicación y la reparación. La expresión desregulada de HMGB2 y su actividad de unión a la cromatina se han asociado con señales proliferativas, inestabilidad genómica y patrones alterados de expresión de genes inflamatorios descritos en múltiples contextos patológicos, incluidos estudios de biología del cáncer y de degeneración tisular.

HMG-2/HMGB2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HMGB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HMGB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HMGB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HMGB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.