Plásmido CRISPR de Activación (h) HLA-G: sc-401226-ACT

HLA-G codifica una molécula no clásica del MHC de clase I que modula el reconocimiento inmunitario al unirse a receptores inhibidores como ILT2/LILRB1, ILT4/LILRB2 y KIR2DL4 en células NK, linfocitos T y poblaciones mieloides. Su expresión favorece la tolerancia inmunitaria en la interfase materno-fetal y contribuye a la regulación de la presentación de antígenos y de la función efectora citotóxica dentro de la red más amplia de puntos de control del MHC clase I/células NK. HLA-G se estudia con frecuencia en contextos de evasión inmunitaria y microambientes inmunosupresores, incluidos la biología del cáncer y escenarios de inflamación crónica. Las variaciones en los niveles de HLA-G y en el uso de sus isoformas se han asociado con la tolerancia al trasplante, la autoinmunidad y la modulación inmunitaria asociada a patógenos, lo que lo convierte en un objetivo útil para la inmunología mecanística.

HLA-G El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HLA-G sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HLA-G El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HLA-G en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HLA-G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HLA-G. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HLA-G y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HLA-G en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HLA-G en células tumorales con expresión de HLA-G silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.