Partículas Lentivirales de Activación (m) HLA-E: sc-437133-LAC

El gen murino H2-T-ps codifica la molécula no clásica del MHC de clase I HLA-E, una proteína conservada de presentación de antígenos que muestra principalmente péptidos derivados de secuencias líderes para regular la inmunidad innata y adaptativa. HLA-E se une a receptores inhibidores y activadores en células NK y en subpoblaciones seleccionadas de linfocitos T, modulando la vigilancia inmunitaria, la concesión de capacidad citotóxica (licenciamiento) y la tolerancia dentro de los tejidos. Su expresión y su repertorio de péptidos integran señales de las vías de procesamiento de antígenos y de ensamblaje del MHC de clase I, lo que influye en las interacciones en la sinapsis inmunológica. La desregulación de la señalización mediada por HLA-E se ha investigado en contextos de evasión inmunitaria viral, edición inmunitaria tumoral, biología del trasplante y modelos de enfermedades inflamatorias.

Las partículas de activación lentiviral HLA-E (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de H2-T-ps en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HLA-E (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción H2-T-ps, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HLA-E. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo H2-T-ps y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.