Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) HLA-DRα: sc-401010-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HLA-DRα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HLA-DRα Double Nickase (h) et le plasmide HLA-DRα Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HLA-DRA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HLA-DRα Antibody (G-7): sc-55593
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HLA-DRα | sc-401010-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HLA-DRα | sc-401010-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DRA code la chaîne HLA-DRα, un composant central des hétérodimères HLA-DR du CMH de classe II, qui présentent aux lymphocytes T CD4+ des peptides dérivés de l’extérieur de la cellule. Cette voie de présentation antigénique repose sur le traitement endosomal, le trafic de la chaîne invariante (CD74) et le chargement des peptides régulé par HLA-DM, reliant la détection innée à l’activation de l’immunité adaptative. L’expression de HLA-DRα est étroitement contrôlée par CIITA et par des programmes transcriptionnels répondant à l’interféron-γ, et elle est couramment utilisée comme marqueur de différenciation et d’activation des cellules présentatrices d’antigène. Des altérations de la biologie de HLA-DR ont été impliquées dans la susceptibilité aux maladies immunomédiées et dans des états inflammatoires, via des effets sur le répertoire peptidique et l’amorçage des lymphocytes T.
HLA-DRα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLA-DRA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLA-DRA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLA-DRA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLA-DRA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.