HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406402
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- HLA-DOβ Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im HLA-DOβ-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HLA-DOβ: sc-69739
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406402 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
HLA-DOB kodiert die HLA-DOβ-Untereinheit, die sich mit HLA-DOα zum HLA-DO-Heterodimer zusammenschließt, das vor allem in antigenpräsentierenden Zellen exprimiert wird. In späten Endosomen und Lysosomen moduliert HLA-DO die Aktivität von HLA-DM, um die Peptidbeladung von MHC‑Klasse‑II-Molekülen feinzujustieren, und prägt damit das Repertoire der Peptide, die CD4+‑T‑Zellen präsentiert werden. Diese Regulation verknüpft HLA-DOβ mit Antigenprozessierung und -präsentation, adaptiver Immuntoleranz sowie Immunantworten auf Infektionen. Eine veränderte Peptideditierung an MHC‑Klasse‑II-Molekülen und Varianten in der HLA-Region sind relevant für Untersuchungen zu Autoimmunität, Mechanismen entzündlicher Erkrankungen und Tumor‑Immun‑Interaktionen, bei denen die Qualität der Antigenpräsentation die Immunerkennung beeinflusst.
Das HLA-DOβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HLA-DOB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HLA-DOB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HLA-DOB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HLA-DOβ-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HLA-DOB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HLA-DOβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf HLA-DOB-Exone abzielen, die für die HLA-DOβ-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere HLA-DOB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom HLA-DOβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HLA-DOβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HLA-DOB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HLA-DOβ HDR-Plasmid (h) und HLA-DOβ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HLA-DOB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HLA-DOB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.