HLA-DOβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406402

Panoramica

HLA-DOB codifica la subunità HLA-DOβ, che si associa a HLA-DOα per formare l’eterodimero HLA-DO, espresso principalmente nelle cellule presentanti l’antigene. All’interno di endosomi tardivi e lisosomi, HLA-DO modula l’attività di HLA-DM per ottimizzare il caricamento dei peptidi sulle molecole di MHC di classe II, determinando il repertorio di peptidi esposti alle cellule T CD4+. Questa regolazione collega HLA-DOβ all’elaborazione e presentazione dell’antigene, alla tolleranza immunitaria adattativa e alle risposte immunitarie alle infezioni. Alterazioni nell’editing dei peptidi su MHC di classe II e variazioni nella regione HLA sono rilevanti negli studi sull’autoimmunità, sui meccanismi delle malattie infiammatorie e sulle interazioni tumore–sistema immunitario, in cui la qualità della presentazione dell’antigene influenza il riconoscimento immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HLA-DOB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HLA-DOB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HLA-DOB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HLA-DOβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HLA-DOB per lo studio della segnalazione di HLA-DOβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HLA-DOB critici per la funzione di HLA-DOβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HLA-DOB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HLA-DOB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HLA-DOβ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HLA-DOβ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HLA-DOB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HLA-DOB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.