Plasmide Double Nickase (h) HLA-B: sc-400627-NIC

HLA-B code une chaîne lourde classique du CMH de classe I qui s’assemble avec la β2‑microglobuline pour présenter des antigènes peptidiques endogènes aux lymphocytes T CD8⁺. Cet axe de présentation antigénique façonne la surveillance immunitaire, influence la sélection thymique et la tolérance périphérique, et s’articule avec la signalisation de l’interféron ainsi qu’avec les voies de traitement de l’antigène impliquant TAP et des composants de l’immunoprotéasome. Les polymorphismes et les altérations d’expression de HLA-B sont liés à la variabilité de la reconnaissance immunitaire antivirale et antitumorale et sont associés à des troubles à médiation immunitaire, notamment la spondylarthrite ankylosante et des réactions d’hypersensibilité aux médicaments. Du fait de son fort polymorphisme et de son rôle central dans la composition de l’immunopeptidome, HLA-B est fréquemment étudié dans des modèles de compatibilité en transplantation, de biologie des infections et d’immunologie du cancer.

HLA-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLA-B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLA-B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLA-B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLA-B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.