Plasmide CRISPR/Cas9 KO HKDC1 (m): sc-432046

Présentation

Hkdc1 code HKDC1, une protéine contenant un domaine hexokinase impliquée dans la phosphorylation du glucose et la régulation de l’utilisation cellulaire du glucose. HKDC1 est associée au métabolisme central du carbone, en contribuant au flux glycolytique et à la coordination de l’homéostasie énergétique avec la fonction mitochondriale et la détection des nutriments. Dans les modèles murins, une activité altérée de Hkdc1 a été associée à des phénotypes métaboliques touchant la gestion du glucose et les voies sensibles à l’insuline, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dérégulation métabolique et des réponses au stress dans le foie et d’autres tissus fortement demandeurs en énergie. Son expression et son couplage fonctionnel au métabolisme des glucides étayent l’exploration de la manière dont des enzymes de type hexokinase façonnent l’adaptation cellulaire à la disponibilité des nutriments.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HKDC1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hkdc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hkdc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hkdc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HKDC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hkdc1 pour l'étude de la signalisation de HKDC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hkdc1 essentiels à la fonction de HKDC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hkdc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HKDC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HKDC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hkdc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HKDC1 plasmide HDR (m) et le HKDC1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hkdc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hkdc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.