Plásmido Doble Nickase (h) Histone H2A.X: sc-400538-NIC

H2AFX codifica la histona H2A.X, una variante de la histona H2A que se fosforila rápidamente en Ser139 (γH2AX) en los sitios de roturas de doble cadena del ADN. Esta modificación actúa como una señal temprana basada en la cromatina que recluta y organiza factores de la respuesta al daño del ADN, coordinando la activación de puntos de control y la elección de la vía de reparación entre la recombinación homóloga y la unión de extremos no homólogos. La señalización dependiente de H2A.X se integra con las respuestas al estrés mediadas por ATM/ATR, la estabilidad de las horquillas de replicación y la remodelación de la cromatina, que en conjunto preservan la integridad del genoma. La desregulación de la señalización de H2A.X o una dinámica alterada de γH2AX se utiliza ampliamente como lectura molecular del estrés genotóxico y es relevante para estudios sobre inestabilidad genómica, biología del cáncer y radiosensibilidad.

Histone H2A.X El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus H2AFX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de H2AFX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de H2AFX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con H2AFX alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.