Histone H1X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411232

Übersicht

H1FX kodiert Histon H1X, eine replikationsunabhängige Linker-Histonvariante, die an nukleosomale DNA bindet und zur höhergeordneten Chromatinkompaktierung sowie zur Organisation des Genoms beiträgt. Durch die Modulation der Chromatinzugänglichkeit beeinflusst H1X Transkriptionsprogramme, das Timing der DNA-Replikation und die Koordination von DNA-Schadenssensorik und -reparaturprozessen. Eine veränderte Zusammensetzung der Linker-Histone kann epigenetische Zustände verschieben und Signalwege beeinträchtigen, die die Zellzykluskontrolle, Differenzierung und Stressantworten steuern. Eine Fehlregulation der Chromatinarchitektur und des Gleichgewichts von Histonvarianten wird häufig bei Krebs und anderen Erkrankungen mit epigenomischer Instabilität beobachtet, was H1FX zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu Struktur‑Funktions‑Beziehungen im Zellkern macht.

Das Histone H1X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des H1FX-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des H1FX-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von H1FX nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Histone H1X-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von H1FX-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Histone H1X-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf H1FX-Exone abzielen, die für die Histone H1X-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere H1FX-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Histone H1X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Histone H1X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des H1FX-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Histone H1X HDR-Plasmid (h) und Histone H1X HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von H1FX-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten H1FX-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.