Histone H1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404845-ACT

HIST1H1B codifica a histona H1.5, um membro da família de histonas H1 (histonas “linker”) que se liga ao DNA nucleossômico nas regiões de entrada/saída para promover a compactação da cromatina em níveis superiores e regular a acessibilidade do genoma. Ao modular a estrutura da cromatina, a histona H1 influencia o controle transcricional, o timing da replicação do DNA e a coordenação das respostas a danos no DNA e do reparo. A expressão alterada ou a regulação pós-traducional de variantes de H1 está associada à desregulação epigenética, a programas de diferenciação aberrantes e a fenótipos proliferativos observados em múltiplos contextos de doença, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em pesquisas de cromatina e transcrição.

Histone H1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HIST1H1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone H1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HIST1H1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HIST1H1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone H1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HIST1H1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone H1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone H1 em células tumorais com expressão de HIST1H1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.