Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hippi (h): sc-412438

Présentation

IFT57 code un composant central du complexe B du transport intraflagellaire (IFT-B), qui assure le trafic antérograde des cargos nécessaires à l’assemblage et au maintien du cil primaire. Par son rôle dans la ciliogenèse, IFT57 contribue à des voies de transduction du signal dépendantes du cil, notamment Hedgehog et d’autres processus médiés par des récepteurs qui coordonnent le développement, la progression du cycle cellulaire et l’homéostasie tissulaire. La perturbation de la fonction IFT-B est associée à des phénotypes de ciliopathie et a été impliquée dans des troubles touchant la biologie squelettique, rénale et rétinienne, ce qui fait d’IFT57 une cible utile pour des études mécanistiques du transport ciliaire. Dans les cellules humaines, la perte d’IFT57 est couramment utilisée pour étudier comment une architecture ciliaire altérée reconfigure les sorties de signalisation et le trafic dépendant des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hippi (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IFT57 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IFT57, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IFT57 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hippi.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IFT57 pour l'étude de la signalisation de Hippi, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IFT57 essentiels à la fonction de Hippi
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IFT57 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hippi plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Hippi plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IFT57. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hippi plasmide HDR (h) et le Hippi (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IFT57 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IFT57 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.