Plasmide CRISPR d'Activation (h) HGFA: sc-404422-ACT

HGFAC code l’activateur du facteur de croissance des hépatocytes (HGFA), une protéase à sérine sécrétée qui convertit protéolytiquement le pro-HGF en HGF actif, contrôlant ainsi la signalisation paracrine via la tyrosine kinase réceptrice MET. En régulant les voies dépendantes de HGF/MET, notamment PI3K–AKT, RAS–MAPK, ainsi que des programmes en aval liés à la motilité cellulaire, à la morphogenèse et au remodelage de la matrice extracellulaire, HGFA contribue à ajuster la réparation tissulaire et la communication épithélio-stromale. Une activité HGFA dérégulée ou une signalisation altérée de l’axe HGF/MET est associée à des réseaux protéasiques aberrants et à des modifications du microenvironnement observées en cancérologie et dans des contextes de remodelage tissulaire inflammatoire. En tant que modulateur en amont de la disponibilité du HGF, HGFAC est fréquemment étudié dans les cascades protéolytiques et les interactions entre voies de signalisation qui influencent des phénotypes liés à l’invasion et l’homéostasie spécifique des organes.

HGFA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HGFAC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HGFA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HGFAC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HGFAC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HGFA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HGFAC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HGFA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HGFA dans les cellules tumorales présentant une expression de HGFAC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.