HEXB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404765-ACT

O gene humano **HEXB** codifica a subunidade beta da **β-hexosaminidase lisossomal**, que forma heterodímeros funcionais com a HEXA ou homodímeros para catalisar a degradação passo a passo do gangliosídeo GM2 e de outros glicoconjugados. Essa atividade enzimática sustenta a renovação de macromoléculas dependente do lisossomo e processos mais amplos ligados ao tráfego endo-lisossomal, à comunicação entre autofagia e lisossomo e ao catabolismo de lipídios. A disfunção de HEXB perturba a homeostase de esfingolipídios e o armazenamento lisossomal, associando o gene a variantes de gangliosidose GM2 e a fenótipos celulares neurodegenerativos impulsionados pelo acúmulo de substratos. Como componente de uma hidrolase lisossomal, o HEXB é frequentemente estudado no contexto da biologia neuronal e glial, do metabolismo lipídico e de respostas ao estresse decorrentes de comprometimento da função lisossomal.

HEXB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HEXB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HEXB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HEXB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HEXB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HEXB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HEXB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HEXB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HEXB em células tumorais com expressão de HEXB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.