Plasmide Double Nickase (m) Heme Oxygenase 1/HMOX1: sc-420882-NIC

Le gène murin *Hmox1* code l’hème oxygénase 1 (HMOX1), une enzyme inductible et sensible au stress qui catalyse la dégradation de l’hème en biliverdine, monoxyde de carbone et fer ferreux, reliant ainsi le renouvellement de l’hème à l’homéostasie rédox. HMOX1 est régulée par des voies de stress oxydatif et électrophile, notamment via la signalisation NRF2–KEAP1, et s’intègre aux réponses au stress inflammatoire et mitochondrial. En modulant les espèces réactives de l’oxygène, la gestion du fer et des programmes transcriptionnels cytoprotecteurs, HMOX1 influence la polarisation des macrophages, la fonction endothéliale et l’adaptation des tissus aux lésions. Une activité déréglée de HMOX1 a été associée à des modèles d’inflammation, d’ischémie-reperfusion, de dysfonctionnements métaboliques, de neurodégénérescence et de biologie du cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hmox1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hmox1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hmox1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hmox1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.