Plasmide CRISPR d'Activation (m) Heme Oxygenase 1/HMOX1: sc-420882-ACT

Hmox1 code l’hème oxygénase 1 (HMOX1), une enzyme inductible et sensible au stress qui catalyse la dégradation de l’hème en biliverdine, fer libre et monoxyde de carbone, contribuant ainsi à moduler l’équilibre rédox cellulaire et la gestion du fer. Dans les cellules murines, HMOX1 est fortement régulée par des voies de stress oxydant et électrophile, notamment la signalisation NRF2/KEAP1, et s’articule avec des programmes inflammatoires contrôlés par NF-κB et les cascades MAPK. En limitant l’activité pro-oxydante médiée par l’hème et en coordonnant la ferritine ainsi que la séquestration du fer, HMOX1 influence la fonction mitochondriale, la protéostasie et la polarisation des macrophages. Une expression dérégulée de Hmox1 est fréquemment étudiée dans des contextes de lésions tissulaires, d’ischémie-reperfusion, d’athérosclérose, de neuroinflammation et de biologie du microenvironnement tumoral, où le stress oxydant et la signalisation immunitaire convergent.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hmox1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hmox1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hmox1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Heme Oxygenase 1/HMOX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hmox1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Heme Oxygenase 1/HMOX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Heme Oxygenase 1/HMOX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hmox1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.