Plásmido Doble Nickase (m) HELIC2: sc-435793-NIC

Snrnp200 codifica la proteína HELIC2 de ratón, una helicasa de ARN esencial de la familia DExD/H-box dentro de la ribonucleoproteína nuclear pequeña U5, que respalda la activación del espliceosoma y las etapas catalíticas del empalme del pre-ARNm. Al remodelar las interacciones ARN–proteína durante el reconocimiento de los sitios de empalme y la ligación de exones, HELIC2 ayuda a mantener la fidelidad del transcriptoma, acoplando la dinámica del empalme con procesos más amplios de procesamiento de ARN y control de la expresión génica. La alteración de helicasas centrales del espliceosoma puede provocar cambios generalizados en el empalme alternativo y respuestas de estrés celular, lo que convierte a Snrnp200 en un punto de entrada útil para estudiar el metabolismo del ARN y las relaciones genotipo‑fenotipo en sistemas mamíferos. El análisis funcional de HELIC2 también es relevante para modelar mecanismos por los cuales la perturbación del espliceosoma contribuye al empalme incorrecto asociado a enfermedad y a una proteostasis alterada en contextos experimentales.

HELIC2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Snrnp200 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Snrnp200. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Snrnp200. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Snrnp200 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.