Partículas Lentivirales de Activación (h) HEL308: sc-404447-LAC

El gen humano **HELQ** codifica la helicasa de ADN **HEL308**, una helicasa 3′→5′ dependiente de ATP que promueve la estabilidad del genoma al procesar horquillas de replicación detenidas e intermediarios de recombinación. HEL308/HELQ participa en la tolerancia al daño del ADN, en las respuestas al estrés replicativo y en la reparación de enlaces cruzados intercatenarios, conectándose con la recombinación homóloga y la señalización del punto de control de la fase S para limitar las aberraciones cromosómicas. La alteración o desregulación de las vías asociadas a HELQ se ha relacionado con una recuperación deficiente de las horquillas de replicación y un aumento de la carga mutacional, lo que la hace relevante para estudios de susceptibilidad al cáncer y fenotipos de deficiencia en la reparación del ADN. Como helicasa acoplada a la replicación, HEL308 se analiza con frecuencia en contextos en los que la protección de la horquilla, el bypass de lesiones y el control de la recombinación determinan el destino celular bajo estrés genotóxico.

Las partículas de activación lentiviral HEL308 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HELQ en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HEL308 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HELQ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HEL308. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HELQ y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.