Plásmido CRISPR de Activación (m) HECTD1: sc-431500-ACT

El gen **Hectd1** del ratón codifica **HECTD1**, una ligasa E3 de ubiquitina de tipo HECT que cataliza la transferencia de ubiquitina a proteínas diana para controlar su estabilidad, localización y salida de señalización. HECTD1 se ha relacionado con la regulación de la proteostasis, la organización del citoesqueleto y la migración celular mediante el remodelado dependiente de ubiquitina de complejos proteicos, influyendo en vías del desarrollo y de respuesta al estrés. En modelos murinos, la alteración de la función de **Hectd1** se ha asociado con el patrón embrionario y el desarrollo del tubo neural, lo que resalta su relevancia para los mecanismos subyacentes a las malformaciones congénitas. Como componente de la vía de la ubiquitina, HECTD1 también se estudia en contextos en los que una ubiquitinación desregulada contribuye a señalización aberrante y a la homeostasis tisular.

HECTD1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hectd1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HECTD1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hectd1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hectd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HECTD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hectd1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HECTD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HECTD1 en células tumorales con expresión de Hectd1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.