Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Headpin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409662
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Headpin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Headpin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Headpin Anticuerpo (E-1): sc-398857
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Headpin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-409662 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SERPINB13 codifica el inhibidor humano de proteasas de serina Headpin, una serpin del clado B (intracelular) expresada de forma destacada en epitelios estratificados. Headpin regula la proteólisis al inhibir determinadas proteasas tipo tripsina, lo que ayuda a mantener la integridad de la barrera epitelial y la homeostasis proteasa–antiproteasa durante la diferenciación y la remodelación tisular. Al limitar la actividad proteasa aberrante, SERPINB13 puede influir en la señalización inflamatoria, la supervivencia celular y las respuestas al estrés asociadas con la lesión epitelial. Se han descrito alteraciones en la expresión de SERPINB13 en diversas patologías epiteliales, lo que la convierte en una diana útil para investigar los mecanismos que vinculan el control de proteasas con la biología de los queratinocitos y fenotipos relevantes para la enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Headpin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SERPINB13 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SERPINB13 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SERPINB13 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Headpin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SERPINB13 para la investigación de la señalización de Headpin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SERPINB13 críticos para la función de Headpin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SERPINB13 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Headpin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Headpin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SERPINB13. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Headpin (h) y el plásmido HDR Headpin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SERPINB13 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SERPINB13 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.