HE4 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426693-LAC

Wfdc2 codifica HE4, un inibitore delle proteasi secreto contenente un dominio WAP (whey acidic protein), implicato nella differenziazione epiteliale, nella regolazione delle proteasi extracellulari e nel rimodellamento del microambiente tissutale locale. Nei modelli murini, l’espressione di HE4 è associata alla biologia della barriera epiteliale e a programmi dipendenti dal contesto infiammatorio che modellano l’adesione cellula-cellula e le dinamiche della matrice extracellulare. Modulando la proteolisi e i segnali mediati dall’attivazione delle proteasi, HE4 può influenzare processi quali la migrazione, comportamenti simili all’invasione in vitro e stati trascrizionali responsivi allo stress. Un’alterata regolazione di WFDC2/HE4 è stata utilizzata come correlato molecolare nella ricerca in ambito oncologico e infiammatorio, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della fisiopatologia epiteliale.

Le particelle di attivazione lentivirale HE4 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Wfdc2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HE4 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Wfdc2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HE4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Wfdc2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.