Partículas Lentivirales de Activación (m) HE4: sc-426693-LAC

Wfdc2 codifica HE4, un inhibidor de proteasas secretado que contiene un dominio de proteína ácida del suero (WAP) e interviene en la diferenciación epitelial, la regulación de proteasas extracelulares y la remodelación del microambiente tisular local. En sistemas murinos, la expresión de HE4 se asocia con la biología de la barrera epitelial y con programas dependientes del contexto inflamatorio que moldean la adhesión célula–célula y la dinámica de la matriz extracelular. Al modular la proteólisis y las señales activadas por proteasas, HE4 puede influir en procesos como la migración, comportamientos tipo invasión in vitro y estados transcripcionales de respuesta al estrés. La regulación alterada de WFDC2/HE4 se ha utilizado como correlato molecular en investigaciones centradas en cáncer e inflamación, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la fisiopatología epitelial.

Las partículas de activación lentiviral HE4 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Wfdc2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HE4 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Wfdc2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HE4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Wfdc2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.