HB-EGF Double Nickase Plasmid (h): sc-400795-NIC

Das humane **HBEGF**-Gen kodiert den heparinbindenden EGF‑ähnlichen Wachstumsfaktor (HB‑EGF), einen membranverankerten Liganden, der durch proteolytische Abspaltung („Shedding“) freigesetzt werden kann und dann als löslicher Wachstumsfaktor vorliegt. HB‑EGF signalisiert hauptsächlich über Rezeptoren der EGFR/ERBB‑Familie und reguliert dadurch die Aktivität der MAPK/ERK‑ und PI3K–AKT‑Signalwege, was Zellproliferation, Überleben, Migration und wundassoziiertes Remodeling beeinflusst. Seine Expression und die Abspaltung der Ektodomäne sind eng mit entzündlichen sowie stressresponsiven Signalwegen und mit der ADAM‑vermittelten Proteaseaktivität an der Zelloberfläche verknüpft. Eine fehlregulierte HBEGF/EGFR‑Signalgebung wurde mit veränderten epithelialen und vaskulären Antworten in Kontexten wie Fibrose, Krebsbiologie und kardiovaskulärem Remodeling in Verbindung gebracht und ist damit für mechanistische Studien zu wachstumsfaktorgetriebenen Programmen relevant.

HB-EGF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HBEGF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HBEGF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HBEGF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HBEGF-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.