Plásmido CRISPR de Activación (m) HAS2: sc-420798-ACT

Mouse Has2 codifica la hialuronano sintasa 2 (HAS2), una enzima de la membrana plasmática que polimeriza el hialuronano, un glucosaminoglucano principal de la matriz extracelular. La producción de hialuronano impulsada por HAS2 modula la organización de la matriz pericelular, la hidratación y la mecanotransducción, e influye en la migración, la adhesión y la proliferación celulares mediante interacciones con receptores como CD44 y RHAMM. La regulación de Has2 vincula la morfogénesis del desarrollo y la remodelación tisular con redes de señalización que incluyen TGF-β, ERK/MAPK y señales inflamatorias que reconfiguran la dinámica de la matriz extracelular. La actividad alterada de HAS2 y la abundancia de hialuronano se asocian con remodelación fibrótica, patología vascular y biología del microambiente tumoral, lo que convierte a Has2 en un nodo útil para estudiar fenotipos dependientes de la matriz in vivo y en células de ratón cultivadas.

HAS2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Has2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HAS2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Has2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Has2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HAS2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Has2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HAS2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HAS2 en células tumorales con expresión de Has2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.