HADHA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430176

概要

マウスHadhaは、ミトコンドリア三機能タンパク質（mitochondrial trifunctional protein: HADHA）のαサブユニットをコードしており、長鎖脂肪酸のβ酸化における主要な酵素複合体です。HADHAはエノイルCoAヒドラターゼ活性および3-ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼ活性を触媒します。HADHAは、脂質分解をアセチルCoA産生および下流のTCA回路フラックスに結び付けることでミトコンドリアのエネルギー代謝を支え、酸化還元バランスや代謝適応に広範な影響を及ぼします。HADHA機能の破綻は、ミトコンドリアでの脂肪酸利用低下と関連し、肝臓、心臓、骨格筋などの酸化的組織に影響する先天代謝異常症とも関係します。そのためHadhaは、ミトコンドリア恒常性、栄養ストレス応答、脂質駆動性シグナル伝達が交差する経路において広く研究されています。

HADHA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHadha遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hadha内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hadhaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HADHAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HADHAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hadha欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HADHAの機能に不可欠なHadhaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hadhaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HADHA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHADHA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hadha遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HADHA HDRプラスミド（m）および HADHA HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHadhaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHadha標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。