GW182 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400906
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GW182 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GW182, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GW182 Anticorpo (A-6): sc-374458
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GW182 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400906 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
TNRC6A codifica a GW182, um componente estrutural central do complexo de silenciamento induzido por microRNA, que coordena a repressão gênica pós-transcricional. A GW182 liga-se às proteínas Argonaute e recruta os complexos deadenilase CCR4–NOT e PAN2–PAN3, promovendo a deadenilação do mRNA, a remoção do “cap” (decapping) e a inibição da tradução em P-bodies citoplasmáticos. Por meio dessas interações, a TNRC6A ajuda a moldar programas de expressão gênica controlados por microRNAs que influenciam o controle do ciclo celular, a diferenciação, as respostas ao estresse e a sinalização imune inata. A desregulação de redes de silenciamento associadas à GW182 tem sido ligada a alterações anômalas na regulação do transcriptoma observadas em múltiplos contextos de doença, incluindo câncer e distúrbios neurológicos, tornando a TNRC6A um alvo útil para estudos mecanísticos em biologia de RNA.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GW182 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TNRC6A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TNRC6A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TNRC6A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GW182.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TNRC6A para a investigação da sinalização de GW182, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TNRC6A críticos para a função GW182
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TNRC6A para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GW182 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GW182 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TNRC6A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GW182 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GW182 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TNRC6A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TNRC6A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.