Gα i-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400453-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα i-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα i-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα i-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNAI3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα i-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400453-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα i-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400453-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAI3 kodiert die menschliche heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gαi‑3, einen GDP/GTP‑regulierten molekularen Schalter, der viele GPCRs mit der Hemmung der Adenylylcyclase und einer verminderten cAMP‑Signalübertragung koppelt. Über nachgeschaltete Effekte auf die PKA‑Aktivität, Ionenkanäle sowie MAPK/ERK‑ und PI3K‑assoziierte Netzwerke trägt Gαi‑3 dazu bei, Chemotaxis, Sekretion und Entscheidungen über Zellwachstum als Reaktion auf extrazelluläre Signale zu koordinieren. Außerdem ist es an Programmen der Membrantraktion und Zellpolarität beteiligt, indem es Vesikeltransport und zytoskelettale Dynamik reguliert. Eine veränderte GPCR–Gαi‑Signalgebung wurde in krankheitsrelevanten zellulären Kontexten mit dysreguliertem proliferativem und migratorischem Verhalten in Verbindung gebracht und stützt mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen.
Gα i-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAI3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAI3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAI3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAI3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.