GSK3 beta Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400090-ACT

Il gene umano **GSK3B** codifica la **glicogeno sintasi chinasi 3 beta (GSK3β)**, una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che integra i segnali derivanti da nutrienti e fattori di crescita per coordinare le decisioni sul destino cellulare. GSK3β è un regolatore negativo centrale della segnalazione canonica **Wnt/β-catenina** e partecipa anche a processi associati a **PI3K–AKT**, al metabolismo **insulina/glicogeno**, a **Hedgehog**, **Notch** e **NF-κB**, influenzando trascrizione, proliferazione, apoptosi e differenziamento. Attraverso la fosforilazione di numerosi substrati, come la β-catenina e vari regolatori trascrizionali, GSK3β modula la dinamica del citoscheletro, il controllo del ciclo cellulare e l’omeostasi metabolica. Un’alterata regolazione della segnalazione di GSK3B è stata implicata in diversi ambiti di ricerca, tra cui biologia del cancro, vie associate alla neurodegenerazione, infiammazione e modelli di patologie metaboliche.

GSK3 beta Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GSK3B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GSK3 beta Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GSK3B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GSK3B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GSK3 beta. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GSK3B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GSK3 beta nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GSK3 beta nelle cellule tumorali con espressione di GSK3B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.