Plásmido CRISPR de Activación (h) GSK3 beta: sc-400090-ACT

El GSK3B humano codifica la glucógeno sintasa quinasa 3 beta (GSK3β), una quinasa de serina/treonina constitutivamente activa que integra señales de nutrientes y factores de crecimiento para coordinar decisiones sobre el destino celular. GSK3β es un regulador negativo central de la señalización canónica Wnt/β-catenina y también participa en procesos asociados a PI3K–AKT, al metabolismo de la insulina y del glucógeno, a Hedgehog, Notch y NF-κB, influyendo en la transcripción, la proliferación, la apoptosis y la diferenciación. Mediante la fosforilación de diversos sustratos como la β-catenina y múltiples reguladores transcripcionales, GSK3β afecta la dinámica del citoesqueleto, el control del ciclo celular y la homeostasis metabólica. La desregulación de la señalización de GSK3B se ha implicado en diversos ámbitos de investigación, incluidos la biología del cáncer, vías asociadas a la neurodegeneración, la inflamación y modelos de enfermedades metabólicas.

GSK3 beta El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSK3B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GSK3 beta El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSK3B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSK3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GSK3 beta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSK3B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GSK3 beta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GSK3 beta en células tumorales con expresión de GSK3B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.