Plásmido CRISPR de Activación (h) GSH-2: sc-407550-ACT

El GSX2 (GSH-2) humano codifica un factor de transcripción homeobox que regula la regionalización y la especificación de linajes neuronales durante el desarrollo del prosencéfalo, con funciones destacadas en la identidad de los progenitores del telencéfalo ventral y en programas de diferenciación de interneuronas. Al unirse a elementos cisreguladores y coordinar redes transcripcionales con otros reguladores del desarrollo, GSH-2 contribuye a controlar las transiciones de proliferación a diferenciación y los módulos de expresión génica posteriores que modelan la formación de circuitos neuronales. La actividad desregulada de GSX2 o una expresión alterada durante el desarrollo se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo mediante la alteración de redes reguladoras de genes que gobiernan las decisiones de destino neuronal. Como marcador y promotor funcional de estados de progenitores neurales, GSX2 se estudia ampliamente en modelos de diferenciación de células madre y en el mapeo de circuitos transcripcionales.

GSH-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GSH-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GSH-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GSH-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GSH-2 en células tumorales con expresión de GSX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.