GRP94 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423491-ACT

Das murine Gen **Hsp90b1** kodiert **GRP94 (gp96)**, ein im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisiertes Chaperon der HSP90-Familie, das die Proteinfaltung, Qualitätskontrolle und ER-Homöostase unterstützt. GRP94 ist essenziell für die Reifung und den Transport ausgewählter sekretorischer und membranständiger Proteine, darunter Integrine und Toll-like-Rezeptoren, und beeinflusst dadurch Zelladhäsion, angeborene Immun-Signalwege und rezeptorvermittelte Signalübertragung. Seine Aktivität ist eng mit der ER-Stress-Signalgebung und der Unfolded-Protein-Response (UPR) gekoppelt, wodurch die Regulation von **Hsp90b1** mit Proteostase, Entzündung und der zellulären Anpassung an Stress verknüpft ist. Eine dysregulierte GRP94-Funktion wurde mit veränderten Immunphänotypen, Störungen der Biologie des sekretorischen Weges und krankheitsrelevanten Stressantworten in Modellen für Krebs und metabolische Dysfunktionen in Verbindung gebracht.

GRP94 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hsp90b1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GRP94 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hsp90b1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hsp90b1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GRP94-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hsp90b1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GRP94-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GRP94-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hsp90b1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.