Plasmide CRISPR d'Activation (h) GRK 4: sc-402816-ACT

La GRK4 humaine (G protein-coupled receptor kinase 4) est une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle les RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) activés, favorisant la désensibilisation et l’internalisation des récepteurs via des mécanismes dépendants de la β-arrestine. Elle est particulièrement étudiée dans les contextes de signalisation dopaminergique et rénale, où elle peut moduler la réactivité des récepteurs et des voies de seconds messagers en aval telles que l’axe AMPc/PKA. L’activité de la GRK4 influence l’extinction des signaux cellulaires, le trafic des récepteurs et un remodelage adaptatif de la signalisation, qui façonne l’homéostasie des récepteurs membranaires. Les variations génétiques et les altérations d’expression de la GRK4 ont été explorées en lien avec des phénotypes cardiométaboliques et rénaux, ce qui confirme sa pertinence pour des études mécanistiques de la biologie des maladies liées aux RCPG.

GRK 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRK4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GRK 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRK4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GRK 4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRK4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GRK 4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GRK 4 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRK4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.