granzyme A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (bovine): sc-437323

Descripción general

La granzima A (GZMA) es una proteasa serina tipo triptasa almacenada en los gránulos de los linfocitos citotóxicos y liberada durante la formación de la sinapsis inmunológica para promover el daño de la célula diana y la señalización inflamatoria. En sistemas bovinos, la actividad de GZMA contribuye a la inmunidad mediada por células al participar en programas proteolíticos que pueden influir en la muerte celular independiente de caspasas, la alteración mitocondrial y las respuestas al daño de ácidos nucleicos. Más allá de la citotoxicidad directa, la granzima A se ha relacionado con la modulación de redes de citocinas y de vías de la inmunidad innata que determinan el reclutamiento de leucocitos y las respuestas impulsadas por antígenos. Las funciones efectoras dependientes de granzimas, cuando están alteradas, son relevantes para estudios de desregulación inmunitaria, inflamación crónica e interacciones hospedador–patógeno en inmunología veterinaria y comparada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO granzyme A (bovine) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares bovine. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína granzyme A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de granzyme A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de granzyme A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido granzyme A CRISPR/Cas9 KO (bovine) y el plásmido granzyme A CRISPR/Cas9 KO (bovine2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR granzyme A (bovine) y el plásmido HDR granzyme A (bovine2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.