GPR43 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-401858-LAC-2

Der humane FFAR2 (GPR43) kodiert einen kurzkettige Fettsäuren erkennenden G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der durch Acetat und Propionat aktiviert wird und die intrazelluläre Signalübertragung über Gαi/o‑ und Gαq‑gekoppelte Signalwege reguliert, einschließlich der Modulation von cAMP, Calciumflüssen und nachgeschalteten MAPK‑Antworten. Er wird besonders ausgeprägt in immunologischen und epithelialen Kontexten exprimiert, wo er Chemotaxis, Zytokinprogramme und barriereassoziierte Entzündungsprozesse prägt und damit mikrobielle Fermentationsmetabolite mit der immunometabolischen Regulation des Wirts verknüpft. Eine Fehlregulation der FFAR2‑Signalgebung wurde mit der Biologie entzündlicher und metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter veränderte angeborene Immunaktivierung und die metabolische Homöostase des Fettgewebes. Das Gene Editing von FFAR2 unterstützt mechanistische Studien zur Ligand‑Rezeptor‑Pharmakologie, zu Bias in der GPCR‑Signalgebung, zur Mikrobiom‑Wirt‑Interaktion im Stoffwechsel sowie zur funktionellen Genomik in relevanten Zellmodellen.

GPR43 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FFAR2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR43 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FFAR2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR43-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FFAR2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.