GPR38 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406289

Übersicht

Der Motilinrezeptor (MLNR), auch bekannt als GPR38, ist ein G‑Protein-gekoppelter Rezeptor der Klasse A, der das Peptidhormon Motilin bindet, um die interdigestive Motilität des Gastrointestinaltrakts zu koordinieren und die Kontraktilität der glatten Muskulatur zu regulieren. Nach Aktivierung koppelt GPR38 an heterotrimere G‑Proteine und beeinflusst dadurch Second-Messenger-Signalwege, einschließlich der Mobilisierung von Calcium und nachgeschalteter Kinasekaskaden, die die Erregbarkeit in enterischen und gastrischen Netzwerken formen. Die Expression und Signalübertragung von MLNR werden genutzt, um Mechanismen zu untersuchen, die den migrating motor complex (MMC), die Magenentleerung und die neuroendokrine Kommunikation im Darm steuern. Eine fehlregulierte Aktivität des Motilinrezeptors wurde im Zusammenhang mit funktionellen gastrointestinalen Störungen und veränderten Darmmotilitäts-Phänotypen untersucht, wodurch MLNR ein relevanter Angriffspunkt für pfadzentrierte Studien in humanen zellulären Modellen ist.

Das GPR38 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MLNR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MLNR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MLNR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR38-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MLNR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR38-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MLNR-Exone abzielen, die für die GPR38-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MLNR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR38 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR38 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MLNR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR38 HDR-Plasmid (h) und GPR38 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MLNR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MLNR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.