GPR19 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407000

Panoramica

GPR19 codifica un recettore orfano accoppiato a proteine G (GPCR) localizzato prevalentemente sulla membrana plasmatica e si ritiene che si accoppi a proteine G eterotrimeriche per modulare la segnalazione dei secondi messaggeri e i programmi trascrizionali a valle. Sebbene il suo ligando endogeno non sia ancora stato definito in modo completo, l’attività di GPR19 è stata collegata alla regolazione dell’eccitabilità cellulare, della segnalazione metabolica e al controllo, dipendente dal contesto, di proliferazione e differenziamento. Le vie mediate da GPCR associate a GPR19 possono intersecarsi con la segnalazione cAMP/PKA, MAPK/ERK e con quella calcio-dipendente, influenzando le decisioni sullo stato cellulare e le risposte allo stress. Alterazioni del panorama della segnalazione GPCR, inclusa l’espressione disregolata di recettori orfani come GPR19, sono oggetto di studio in condizioni multifattoriali che spaziano dalla neurobiologia all’infiammazione fino a fenotipi correlati al cancro, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR19 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR19 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR19 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR19 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR19.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR19 per lo studio della segnalazione di GPR19, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPR19 critici per la funzione di GPR19
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR19 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR19. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR19 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR19 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR19 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR19 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.