GPR19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407000

Übersicht

GPR19 kodiert einen verwaisten G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der überwiegend in der Plasmamembran lokalisiert ist und vermutlich an heterotrimere G‑Proteine koppelt, um Second‑Messenger-Signalwege und nachgeschaltete transkriptionelle Programme zu beeinflussen. Obwohl sein endogener Ligand bislang nicht vollständig definiert ist, wird die Aktivität von GPR19 mit der Regulation der zellulären Erregbarkeit, metabolischer Signalgebung sowie einer kontextabhängigen Steuerung von Proliferation und Differenzierung in Verbindung gebracht. GPCR-vermittelte Signalwege, die mit GPR19 assoziiert sind, können mit cAMP/PKA-, MAPK/ERK- und calciumabhängiger Signalgebung interagieren und so Zellzustandsentscheidungen und Stressantworten prägen. Veränderte GPCR-Signallandschaften, einschließlich einer dysregulierten Expression verwaister Rezeptoren wie GPR19, werden in multifaktoriellen Erkrankungen untersucht, die Neurobiologie, Entzündung und krebsassoziierte Phänotypen umfassen, was seine Relevanz für mechanistische Studien unterstreicht.

Das GPR19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPR19-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPR19-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPR19 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR19-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPR19-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR19-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPR19-Exone abzielen, die für die GPR19-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPR19-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPR19-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR19 HDR-Plasmid (h) und GPR19 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPR19-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPR19-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.