Plásmido Doble Nickase (h) GPR120: sc-401362-NIC

FFAR4 codifica GPR120, un receptor acoplado a proteína G sensible a ácidos grasos de cadena larga, expresado en tipos celulares metabólicamente activos y en células inmunitarias, donde funciona como un receptor de nutrientes que conecta la disponibilidad de lípidos con la señalización intracelular. Tras su activación, GPR120 pone en marcha vías dependientes de proteínas G y de β-arrestina que modulan la dinámica de segundos mensajeros, cascadas de quinasas y programas transcripcionales implicados en la sensibilidad a la insulina, la diferenciación de adipocitos y la señalización inflamatoria. Estos procesos se entrecruzan con una regulación metabólica más amplia y con el diálogo inmunometabólico, lo que convierte a FFAR4 en un nodo estudiado con frecuencia en mecanismos relacionados con la obesidad y la diabetes, así como en modelos de inflamación crónica. La señalización alterada de GPR120 también se ha investigado en el contexto de la fisiología gastrointestinal y la inflamación asociada a tumores, lo que respalda su utilidad como herramienta para sondear vías en diversos sistemas celulares.

GPR120 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FFAR4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FFAR4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FFAR4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FFAR4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.