GPR116 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408424-ACT

ADGRF5 (GPR116) ist ein Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelter Rezeptor mit einer großen extrazellulären N‑Terminus‑Domäne und einer GPCR‑Proteolyse‑Stelle, die Interaktionen der extrazellulären Matrix und Zell‑Zell‑Kontakte mit intrazellulärer Signalübertragung verknüpft. Er wird in epithelialen und endothelialen Kompartimenten exprimiert, unter anderem in der Lunge, wo er über GPCR‑vermittelte Signalwege wie cAMP/PKA‑ und Rho‑GTPase‑Signalgebung zur Gewebehomöostase und zu barrierebezogenen Prozessen beiträgt. GPR116 wurde mit der Regulation des Surfactant‑Gleichgewichts und der Alveolenfunktion in Verbindung gebracht; eine veränderte Expression ist in respiratorischem Gewebe mit entzündlichem Remodeling und fibrotischen Antworten assoziiert. Eine Dysregulation von ADGRF5 wurde zudem in mehreren krebsbezogenen transkriptomischen Datensätzen berichtet, was seinen Einsatz in Studien zu Tumor‑Mikroumgebungs‑Interaktionen, Adhäsionssignalgebung und Zellmigration unterstützt.

GPR116 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADGRF5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR116 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADGRF5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADGRF5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR116-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADGRF5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR116-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR116-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADGRF5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.