Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPNMB: sc-402966-ACT

GPNMB (glycoprotéine B non métastatique du mélanome) est une glycoprotéine transmembranaire de type I, particulièrement abondante dans les cellules de la lignée myéloïde et les populations mélanocytaires, où elle contribue à l’adhésion cellulaire, à la migration et au remodelage tissulaire. Elle est impliquée dans des processus associés aux lysosomes et aux endosomes et peut moduler la signalisation inflammatoire ainsi que la fonction des cellules présentatrices d’antigènes via des interactions avec la matrice extracellulaire et des partenaires de régulation immunitaire. Des altérations de l’expression de GPNMB ont été rapportées dans divers contextes, notamment la biologie du mélanome, la neuro-inflammation, la fibrose et le remodelage du microenvironnement tumoral et immunitaire, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud mécanistique dans l’étude de l’adaptation au stress et des programmes de différenciation cellulaire. In vitro, la régulation de GPNMB est souvent étudiée en parallèle de voies contrôlant la polarisation des macrophages, l’activité des ostéoclastes et des phénotypes de type transition épithélio-mésenchymateuse.

GPNMB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPNMB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPNMB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPNMB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPNMB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPNMB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPNMB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPNMB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPNMB dans les cellules tumorales présentant une expression de GPNMB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.