Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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GPI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402796
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPI Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GPI, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPI Antibody (H-10): sc-365066
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402796 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La glucosio-6-fosfato isomerasi (GPI) è un enzima multifunzionale che catalizza l’interconversione reversibile tra glucosio-6-fosfato e fruttosio-6-fosfato, un passaggio centrale che collega glicolisi e gluconeogenesi. Controllando il flusso del carbonio attraverso queste vie, la GPI influenza la produzione cellulare di ATP, la disponibilità di precursori biosintetici e l’equilibrio redox, contribuendo così a modellare l’adattamento metabolico in condizioni di stress. Oltre al suo ruolo metabolico nel citosol, è stato riportato che la GPI partecipi anche a contesti di segnalazione extracellulare, mettendo in relazione il metabolismo con la motilità cellulare e le interazioni con il microambiente. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di GPI sono associate a disregolazione metabolica e sono state studiate in diversi contesti, tra cui l’anemia dovuta a deficit enzimatico ereditario e il rimodellamento metabolico osservato in modelli di malattie proliferative.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPI (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPI in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPI insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPI a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPI.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPI per lo studio della segnalazione di GPI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GPI critici per la funzione di GPI
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPI per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GPI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPI. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GPI Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPI (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPI per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPI definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.