GPI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402796

Übersicht

Glukose-6-phosphat-Isomerase (GPI) ist ein multifunktionelles Enzym, das die reversible Umwandlung von Glukose-6-phosphat und Fruktose-6-phosphat katalysiert – ein zentraler Schritt, der Glykolyse und Glukoneogenese miteinander verbindet. Durch die Steuerung des Kohlenstoffflusses in diesen Stoffwechselwegen beeinflusst GPI die zelluläre ATP-Produktion, die Verfügbarkeit biosynthetischer Vorstufen und das Redoxgleichgewicht und prägt damit die metabolische Anpassung unter Stress. Über seine zytosolische Stoffwechselfunktion hinaus wurde berichtet, dass GPI auch an extrazellulären Signalprozessen beteiligt ist und so den Stoffwechsel mit Zellbeweglichkeit und Interaktionen im Mikromilieu verknüpft. Eine veränderte GPI-Aktivität oder -Expression steht mit metabolischer Dysregulation in Zusammenhang und wurde u. a. in Kontexten wie Anämie infolge eines erblichen Enzymdefekts sowie metabolischer Umprogrammierung in Modellen proliferativer Erkrankungen untersucht.

Das GPI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPI-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPI-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPI nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPI-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPI-Exone abzielen, die für die GPI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPI-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPI-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPI HDR-Plasmid (h) und GPI HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPI-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPI-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.