GPAM Double Nickase Plasmid (h): sc-403961-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPAM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPAM Double-Nickase-Plasmid (h) und GPAM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPAM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GPAM: sc-398135
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPAM Double Nickase Plasmid (h) | sc-403961-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPAM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403961-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPAM (Glycerol-3-phosphat-Acyltransferase, mitochondrial) kodiert eine zentrale Acyltransferase, die den ersten festgelegten Schritt der de-novo-Glycerolipidsynthese katalysiert, indem sie Glycerol-3-phosphat in Lysophosphatidsäure umwandelt. Durch die Steuerung des Stoffflusses in Richtung Phosphatidsäure, Triacylglycerole und nachgelagerte Phospholipid-Pools verknüpft GPAM den mitochondrialen Lipidstoffwechsel mit zellulärer Energiespeicherung, Membranbiogenese und Lipidsignalgebung. Die GPAM-Aktivität steht im Schnittpunkt von Fettsäureaufnahme und dem Gleichgewicht der β‑Oxidation, der Bildung von Lipidtröpfchen sowie Stressantworten des Stoffwechsels. Eine dysregulierte GPAM-Expression oder -Aktivität wurde mit verändertem Lipidhandling in Leber- und Fettgewebe in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Insulinresistenz, Steatose und breiteren kardiometabolischen Phänotypen untersucht.
GPAM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPAM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPAM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPAM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPAM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.