Plásmido Doble Nickase (m) gp91phox: sc-419890-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)gp91phox consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa gp91phox (m) y el plásmido de doble nickasa gp91phox (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cybb. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) gp91phox | sc-419890-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) gp91phox | sc-419890-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Cybb codifica gp91phox (NOX2), la subunidad catalítica de membrana del complejo NADPH oxidasa de los fagocitos, que transfiere electrones desde el NADPH al oxígeno molecular para generar superóxido y, posteriormente, especies reactivas de oxígeno. Este estallido oxidativo contribuye a la defensa antimicrobiana, a la señalización dependiente del estado redox y a la regulación de las respuestas inflamatorias mediante vías que influyen en la maduración del fagosoma y en la producción de citocinas. La actividad de gp91phox requiere el ensamblaje con p22phox y con factores citosólicos como p47phox, p67phox y las GTPasas Rac en las membranas celulares. La alteración de la producción de ROS dependiente de Cybb se utiliza ampliamente para modelar cambios en la función inmunitaria innata y mecanismos de estrés oxidativo relevantes para fenotipos de inmunodeficiencia e inflamación en sistemas murinos.
gp91phox El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cybb en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cybb. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cybb. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cybb alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.