Plasmide Double Nickase (h) GnRHR: sc-401783-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GnRHR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GnRHR Double Nickase (h) et le plasmide GnRHR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GNRHR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GnRHR Antibody (GRX-5): sc-69845
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GnRHR | sc-401783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GnRHR | sc-401783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNRHR code le récepteur humain de l’hormone de libération des gonadotrophines (GnRHR), un récepteur couplé aux protéines G de type rhodopsine, principalement exprimé dans les gonadotrophes de l’hypophyse. Après liaison de la GnRH hypothalamique, le GnRHR se couple surtout à Gαq/11 pour activer la phospholipase Cβ, augmentant la signalisation IP3/DAG, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et l’activité des voies PKC/MAPK afin de réguler la transcription et la sécrétion de l’hormone lutéinisante et de l’hormone folliculo-stimulante. Cet axe de signalisation intègre des entrées endocrines pulsatives pour contrôler le développement reproducteur et la fertilité, et des perturbations de la fonction de GNRHR sont associées à des troubles de l’axe hypothalamo–hypophyso–gonadique, tels que l’hypogonadisme hypogonadotrope congénital et des phénotypes endocriniens reproducteurs apparentés. Dans des modèles cellulaires, le GnRHR constitue un nœud expérimental commode pour étudier la désensibilisation des GPCR, le trafic dépendant de la β-arrestine et le décodage de la fréquence des stimuli.
GnRHR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNRHR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNRHR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNRHR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNRHR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.