Plásmido Doble Nickase (h) GlyR α1: sc-404734-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GlyR α1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GlyR α1 (h) y el plásmido de doble nickasa GlyR α1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GLRA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GlyR α1 Anticuerpo (2E7): sc-293498
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GlyR α1 | sc-404734-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GlyR α1 | sc-404734-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLRA1 codifica la subunidad alfa 1 (GlyR α1) del receptor de glicina, un canal de cloruro activado por ligando que media la neurotransmisión inhibitoria rápida en la médula espinal, el tronco encefálico y otras regiones del SNC. Tras la unión de la glicina, GlyR α1 contribuye a la entrada de cloruro y a la hiperpolarización de la membrana, modulando la inhibición sináptica y la excitabilidad de los circuitos motores. Este receptor participa en la señalización de canales iónicos regulados por neurotransmisores y en la función de las sinapsis inhibitorias, con efectos posteriores sobre los umbrales de disparo neuronal y la sincronización de redes. La variación genética o la disfunción de GLRA1 se asocia con una alteración del tono inhibitorio y se ha vinculado a fenotipos de sobresalto/hiperplexia (hyperekplexia) y a anomalías neurofisiológicas relacionadas, relevantes para modelos de control motor y procesamiento sensorial.
GlyR α1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLRA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLRA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLRA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLRA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.