Plásmido CRISPR de Activación (h) glypican-1: sc-402002-ACT

El GPC1 humano codifica la glicpican-1, un proteoglucano de heparán sulfato anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se localiza en la superficie celular y se une a diversos factores de crecimiento, morfógenos y componentes de la matriz extracelular. Al modular la disponibilidad de ligandos y la interacción con sus receptores, la glicpican-1 influye en la señalización de vías como FGF, VEGF, Wnt, Hedgehog y TGF-β, con efectos posteriores sobre la proliferación, la adhesión, la migración y programas angiogénicos. La expresión alterada de GPC1 y la liberación (shedding) de glicpican-1 se han asociado con cambios en la comunicación dentro del microambiente tumoral, fenotipos invasivos y estudios de biomarcadores en múltiples contextos de cáncer. Más allá de la oncología, la regulación dependiente de glicpican-1 de las interacciones del heparán sulfato es relevante para procesos del neurodesarrollo y para las respuestas celulares a la lesión y la inflamación.

glypican-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

glypican-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de glypican-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de glypican-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía glypican-1 en células tumorales con expresión de GPC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.