Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glycophorin A: sc-417801-ACT

GYPA code la glycophorine A, une sialoglycoprotéine très abondante de la membrane des érythrocytes humains, qui contribue à la charge de surface des globules rouges, à la stabilité membranaire et aux interactions avec le milieu extracellulaire. En tant que principal support des antigènes du groupe sanguin MNS, GYPA participe à la définition de l’identité antigénique des érythrocytes et influence des processus tels que la reconnaissance cellule–cellule et la compatibilité immunitaire. Les variations d’expression ou de séquence de GYPA sont pertinentes pour des phénotypes hématologiques et l’immunologie transfusionnelle, et GYPA est fréquemment utilisée comme marqueur de lignée dans les études de l’érythropoïèse et de la différenciation des globules rouges. La biologie de la glycophorine A est également exploitée pour étudier les interactions hôte–pathogène à la surface des érythrocytes ainsi que les mécanismes qui régissent le trafic des protéines membranaires et la glycosylation dans les cellules érythroïdes.

Glycophorin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GYPA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glycophorin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GYPA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GYPA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glycophorin A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GYPA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glycophorin A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glycophorin A dans les cellules tumorales présentant une expression de GYPA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.