Plásmido CRISPR de Activación (h) Glycophorin A: sc-417801-ACT

GYPA codifica la glicoforina A, una sialoglucoproteína muy abundante de la membrana del eritrocito humano que contribuye a la carga superficial de los glóbulos rojos, a la estabilidad de la membrana y a las interacciones con el medio extracelular. Como principal portadora de antígenos del sistema de grupos sanguíneos MNS, GYPA participa en la definición de la identidad antigénica del eritrocito e influye en procesos como el reconocimiento célula–célula y la compatibilidad inmunitaria. La variación en la expresión o en la secuencia de GYPA es relevante para fenotipos hematológicos y para la inmunología de la transfusión, y se utiliza con frecuencia como marcador de linaje en estudios de eritropoyesis y diferenciación de glóbulos rojos. La biología de la glicoforina A también se aprovecha para investigar las interacciones hospedador–patógeno en la superficie del eritrocito y los mecanismos que regulan el tráfico de proteínas de membrana y la glicosilación en células eritroides.

Glycophorin A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GYPA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glycophorin A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GYPA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GYPA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glycophorin A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GYPA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glycophorin A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glycophorin A en células tumorales con expresión de GYPA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.