Plasmide Double Nickase (h) Glutathione Peroxidase 1/GPX1: sc-400631-NIC

La glutathion peroxydase 1 (GPX1) est une sélénoenzyme cytosolique qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en eau et en alcools correspondants en utilisant le glutathion, limitant ainsi les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et à l’ADN. En tant que composant central de l’homéostasie redox cellulaire, GPX1 s’articule avec le métabolisme du glutathion, la signalisation des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les réponses antioxydantes au stress qui façonnent la fonction mitochondriale et la signalisation inflammatoire. Une activité ou une expression altérée de GPX1 a été associée à une dérégulation du stress oxydatif, à une instabilité génomique et à des modifications des programmes d’apoptose et de prolifération. Ces caractéristiques font de GPX1 un nœud utile pour étudier la régulation dépendante du redox au sein des voies métaboliques et des voies d’adaptation au stress.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.