Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase IIβ: sc-404394-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase IIβ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Glucosidase IIβ Double Nickase (h) et le plasmide Glucosidase IIβ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKCSH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Glucosidase IIβ Antibody (H-4): sc-374457
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase IIβ | sc-404394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Glucosidase IIβ | sc-404394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCSH code la sous-unité β de la glucosidase II, un complexe enzymatique luminal du réticulum endoplasmique (RE) qui élimine des résidus de glucose des glycanes N-liés au cours de la maturation des glycoprotéines. Cette étape de maturation soutient le cycle de contrôle qualité calnexine/calréticuline et contribue à coordonner la dégradation associée au RE (ERAD) des protéines mal repliées, reliant ainsi la fonction de PRKCSH à la protéostasie et à la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées. Une perturbation de l’activité de la glucosidase IIβ peut affecter la sécrétion et l’expression à la surface des glycoprotéines, modifiant la signalisation cellulaire et l’adaptation au stress. Des variations génétiques de PRKCSH ont été associées à la maladie polykystique du foie à transmission autosomique dominante, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude de la biologie épithéliale, du stress des organites et des voies dépendantes des glycoprotéines.
Glucosidase IIβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKCSH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKCSH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKCSH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKCSH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.