Plásmido CRISPR de Activación (h) Glucagon Receptor: sc-402018-ACT

GCGR codifica el receptor humano de glucagón, un receptor acoplado a proteína G de clase B que se une al glucagón y se acopla principalmente a Gαs para estimular la adenilato ciclasa, aumentar el cAMP y activar programas transcripcionales dependientes de PKA. Este eje de señalización regula la producción hepática de glucosa, la glucogenólisis y el metabolismo lipídico, y se intersecta con la expresión génica mediada por CREB, las respuestas al estrés metabólico y el control endocrino de la homeostasis energética. La alteración de la expresión o la señalización de GCGR se ha implicado en una regulación anómala del manejo de glucosa y lípidos, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de las enfermedades metabólicas. Como receptor de membrana con lecturas downstream bien definidas, GCGR constituye un nodo manejable para diseccionar vías impulsadas por hormonas en hepatocitos y otros tipos celulares relevantes.

Glucagon Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GCGR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glucagon Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GCGR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GCGR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glucagon Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GCGR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glucagon Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glucagon Receptor en células tumorales con expresión de GCGR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.