Plásmido Doble Nickase (h) GLI-3: sc-400853-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GLI-3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GLI-3 (h) y el plásmido de doble nickasa GLI-3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GLI3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GLI-3 Anticuerpo (B-4): sc-74478
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GLI-3 | sc-400853-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GLI-3 | sc-400853-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLI3 codifica GLI-3, un factor de transcripción con dedos de zinc que actúa como activador o represor dependiente del contexto en la señalización Hedgehog. GLI-3 integra señales de Sonic Hedgehog para regular programas transcripcionales que controlan el patrón embrionario, el desarrollo de las extremidades y del sistema nervioso, y la especificación del destino celular mediante transducción de señales dependiente del cilio primario. El procesamiento proteolítico y la regulación postraduccional de GLI-3 influyen en el equilibrio entre las formas represora y activadora, moldeando la expresión génica aguas abajo y los gradientes de morfógenos. La actividad o la dosis alteradas de GLI3 se asocian con fenotipos congénitos del desarrollo y contribuyen a una salida aberrante de la vía Hedgehog, relevante para estudios mecanísticos de diferenciación y de redes de señalización oncogénica.
GLI-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLI3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLI3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLI3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLI3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.