GLI-1/GLI1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400266-NIC

GLI1 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che funge da principale effettore terminale della segnalazione Hedgehog, integrando segnali a monte derivanti dall'attività di PTCH1/SMO per regolare programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento e patterning tissutale. GLI-1/GLI1 modula la trascrizione dei bersagli della via coinvolti nella progressione del ciclo cellulare, in fenotipi di tipo staminale e in programmi epitelio–mesenchimali, e partecipa alla regolazione a feedback all'interno della rete Hedgehog. Un'attività di GLI1 deregolata è associata a una segnalazione dello sviluppo aberrante ed è spesso studiata in contesti di attivazione oncogenica della via, dove contribuisce a un rimaneggiamento trascrizionale e a un'alterata identità cellulare. In quanto regolatore nucleare legante il DNA, GLI1 rappresenta un nodo trattabile per analizzare il controllo trascrizionale dipendente dal segnale e le reti geniche a valle in sistemi modello umani.

GLI-1/GLI1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GLI1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GLI1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GLI1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GLI1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.