Plasmide Double Nickase (h) GLI-1/GLI1: sc-400266-NIC

GLI1 code un facteur de transcription à doigts de zinc qui constitue un effecteur terminal majeur de la signalisation Hedgehog, en intégrant les signaux en amont issus de l’activité PTCH1/SMO afin de réguler des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation et la mise en place des tissus. GLI-1/GLI1 module la transcription des cibles de la voie impliquées dans la progression du cycle cellulaire, des phénotypes de type « cellules souches » et des programmes épithélio-mésenchymateux, et participe à la régulation par rétroaction au sein du réseau Hedgehog. Une activité dérégulée de GLI1 est associée à une signalisation développementale aberrante et est fréquemment étudiée dans des contextes d’activation oncogénique de la voie, où elle contribue à une reprogrammation transcriptionnelle et à une identité cellulaire altérée. En tant que régulateur nucléaire se liant à l’ADN, GLI1 représente un nœud accessible pour disséquer le contrôle transcriptionnel dépendant des signaux et les réseaux de gènes en aval dans des systèmes modèles humains.

GLI-1/GLI1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLI1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLI1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLI1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.