GlcAT-S Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408633

Descripción general

B3GAT2 codifica la glucuroniltransferasa S (GlcAT-S), una glicosiltransferasa residente en el Golgi que transfiere ácido glucurónico a aceptores de carbohidratos específicos durante la maduración de los glicanos. Esta actividad contribuye a la biosíntesis y la remodelación de glicoconjugados de la superficie celular y de la matriz extracelular, e influye en el procesamiento de glicoproteínas, en las estructuras de carbohidratos asociadas a proteoglicanos y, de forma más amplia, en programas de señalización y adhesión dependientes de la glicosilación. Al moldear la composición de los glicanos, GlcAT-S puede modular la organización de receptores, las interacciones célula–célula y los eventos de unión a la matriz, que son centrales para la homeostasis tisular y la diferenciación celular. Las vías de glicosilación desreguladas en las que participa B3GAT2 se han investigado en el contexto de alteraciones en la comunicación celular y en respuestas al estrés relevantes para múltiples fenotipos asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GlcAT-S (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen B3GAT2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del B3GAT2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de B3GAT2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GlcAT-S.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en B3GAT2 para la investigación de la señalización de GlcAT-S, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de B3GAT2 críticos para la función de GlcAT-S
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de B3GAT2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GlcAT-S CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GlcAT-S CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus B3GAT2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GlcAT-S (h) y el plásmido HDR GlcAT-S (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología B3GAT2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana B3GAT2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.