GKLF/KLF4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400312-LAC

KLF4 (GKLF) kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der die epitheliale Differenzierung, die Kontrolle des Zellzyklus und die Aufrechterhaltung der zellulären Identität reguliert. Als kontextabhängiger Regulator ist KLF4 mit WNT/β-Catenin-, TGF-β/SMAD-, Notch- und p53-assoziierten Programmen verknüpft, um Proliferation, Barrierefunktion und Stressantworten zu koordinieren. KLF4 ist ein kanonischer Reprogrammierungsfaktor und trägt zur Stammzellähnlichkeit und Linienplastizität bei, indem es Chromatin- und Transkriptionsnetzwerke formt. Eine fehlregulierte KLF4-Aktivität wurde mit abweichender Differenzierung und Proliferation bei mehreren menschlichen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was KLF4 zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien der Epithelbiologie, Entzündung und tumorassoziierter Transkriptionszustände macht.

GKLF/KLF4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KLF4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GKLF/KLF4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KLF4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GKLF/KLF4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KLF4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.